通用腺伴随病毒载体的构建及表达报告基因GFP的实验研究
通用腺伴随病毒载体的构建及表达报告基因GFP的实验研究
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西安交通大学医学院第二附属医院耳鼻喉科,陕西西安,710004%西安华广生物工程有限公司,陕西西安,710025
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Chinese
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西安交通大学医学院第二附属医院耳鼻喉科,陕西西安,710004%西安华广生物工程有限公司,陕西西安,710025
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目的构建基因治疗通用型腺伴随病毒（AAV）载体并检测其转染外源基因作用。方法使用限制性内切酶切除pSSV9int质粒中的AAV病毒Rep和Cap基因元件后，插入了重组腺病毒专用穿梭质粒-pACCMVpLpA的含有CMV启动子、多克隆位点（MCS）和多聚腺苷酸信号（PolyA）的表达盒，构建了重组AAV通用载体质粒pSSHG-CMV。在该质粒MCS插入绿色荧光蛋白（GFP）基因后，使用pSSHG-CMV—GFP、GFP140和pAAV／Ad三种质粒共转染293包装细胞，制备GFP重组AAV。应用斑点杂交实验检测重组病毒滴度，并将该病毒感染新生大鼠NIH3T3细胞，荧光显微镜观察GFP表达。结果重组AAV的滴度在浓缩前可达2×10^11 cfu／mL，浓缩后可达2×10^13 cfu／mL，表明...
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通用腺伴随病毒载体的构建及表达报告基因GFP的实验研究
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Record Identifier
TN_cdi_wanfang_journals_xaykdxxb200701004
Permalink
https://devfeature-collection.sl.nsw.gov.au/record/TN_cdi_wanfang_journals_xaykdxxb200701004
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ISSN
1671-8259
DOI
10.3969/j.issn.1671-8259.2007.01.004
